ความสำคัญของการระบุแบคทีเรียในห้องคลีนรูม

ในห้องคลีนรูมมีแหล่งกำเนิดการปนเปื้อนหลักอยู่สองแหล่ง ได้แก่ อนุภาคและจุลินทรีย์ ซึ่งอาจเกิดจากปัจจัยจากมนุษย์และสิ่งแวดล้อม หรือกิจกรรมที่เกี่ยวข้องในกระบวนการ แม้จะพยายามอย่างเต็มที่แล้ว การปนเปื้อนก็ยังคงแทรกซึมเข้าไปในห้องคลีนรูมได้ ปัจจัยที่มักพบการปนเปื้อน ได้แก่ ร่างกายของมนุษย์ (เซลล์ เส้นผม) ปัจจัยด้านสิ่งแวดล้อม เช่น ฝุ่น ควัน หมอก หรืออุปกรณ์ (อุปกรณ์ห้องปฏิบัติการ อุปกรณ์ทำความสะอาด) และเทคนิคการเช็ดทำความสะอาดและวิธีการทำความสะอาดที่ไม่เหมาะสม

ผู้ที่มักปนเปื้อนมากที่สุดคือผู้คน แม้จะมีการแต่งกายที่เข้มงวดที่สุดและมีขั้นตอนการปฏิบัติงานที่เข้มงวดที่สุด แต่ผู้ปฏิบัติงานที่ได้รับการฝึกอบรมอย่างไม่ถูกต้องกลับเป็นภัยคุกคามที่ใหญ่ที่สุดของการปนเปื้อนในห้องคลีนรูม พนักงานที่ไม่ปฏิบัติตามแนวทางของห้องคลีนรูมถือเป็นปัจจัยเสี่ยงสูง ตราบใดที่พนักงานคนใดคนหนึ่งทำผิดพลาดหรือลืมขั้นตอนใดๆ ก็จะนำไปสู่การปนเปื้อนทั่วทั้งห้องคลีนรูม บริษัทสามารถรับประกันความสะอาดของห้องคลีนรูมได้ด้วยการเฝ้าระวังและอัปเดตการฝึกอบรมอย่างต่อเนื่อง โดยที่อัตราการปนเปื้อนเป็นศูนย์

แหล่งที่มาของการปนเปื้อนที่สำคัญอื่นๆ ได้แก่ เครื่องมือและอุปกรณ์ หากเช็ดรถเข็นหรือเครื่องจักรอย่างหยาบๆ ก่อนเข้าห้องคลีนรูม อาจทำให้มีจุลินทรีย์เข้ามาได้ บ่อยครั้งที่พนักงานไม่ทราบว่าอุปกรณ์ที่มีล้อจะกลิ้งทับพื้นผิวที่ปนเปื้อนขณะถูกเข็นเข้าไปในห้องคลีนรูม พื้นผิว (รวมถึงพื้น ผนัง อุปกรณ์ ฯลฯ) จะถูกทดสอบเป็นประจำเพื่อหาจำนวนเชื้อโดยใช้แผ่นสัมผัสที่ออกแบบมาเป็นพิเศษซึ่งมีอาหารเลี้ยงเชื้อ เช่น Trypticase Soy Agar (TSA) และ Sabouraud Dextrose Agar (SDA) TSA เป็นอาหารเลี้ยงเชื้อที่ออกแบบมาสำหรับแบคทีเรีย และ SDA เป็นอาหารเลี้ยงเชื้อที่ออกแบบมาสำหรับเชื้อราและยีสต์ โดยทั่วไป TSA และ SDA จะถูกบ่มที่อุณหภูมิต่างกัน โดย TSA จะถูกบ่มที่อุณหภูมิ 30-35 องศาเซลเซียส ซึ่งเป็นอุณหภูมิที่เหมาะสมสำหรับการเจริญเติบโตของแบคทีเรียส่วนใหญ่ อุณหภูมิ 20-25 องศาเซลเซียสเป็นอุณหภูมิที่เหมาะสมสำหรับเชื้อราและยีสต์ส่วนใหญ่

การไหลเวียนของอากาศเคยเป็นสาเหตุที่พบบ่อยของการปนเปื้อน แต่ปัจจุบันระบบปรับอากาศและระบายอากาศ (HVAC) ในห้องคลีนรูมได้ขจัดการปนเปื้อนในอากาศได้เกือบหมด อากาศในห้องคลีนรูมได้รับการควบคุมและตรวจสอบอย่างสม่ำเสมอ (เช่น รายวัน รายสัปดาห์ รายไตรมาส) เพื่อดูจำนวนอนุภาค ปริมาณอนุภาคที่มีชีวิตอยู่ อุณหภูมิ และความชื้น แผ่นกรอง HEPA ใช้เพื่อควบคุมจำนวนอนุภาคในอากาศและสามารถกรองอนุภาคขนาดเล็กได้ถึง 0.2 ไมโครเมตร โดยปกติแล้วแผ่นกรองเหล่านี้จะทำงานอย่างต่อเนื่องในอัตราการไหลที่ปรับเทียบแล้วเพื่อรักษาคุณภาพอากาศในห้อง ความชื้นมักจะถูกควบคุมให้อยู่ในระดับต่ำเพื่อป้องกันการแพร่กระจายของจุลินทรีย์ เช่น แบคทีเรียและเชื้อรา ซึ่งชอบสภาพแวดล้อมที่มีความชื้น

ในความเป็นจริง แหล่งปนเปื้อนที่สูงที่สุดและพบบ่อยที่สุดในห้องคลีนรูมคือผู้ปฏิบัติงาน

แหล่งที่มาและเส้นทางการปนเปื้อนไม่ได้แตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญในแต่ละอุตสาหกรรม แต่มีความแตกต่างกันในแง่ของระดับการปนเปื้อนที่ยอมรับได้และยอมรับไม่ได้ในแต่ละอุตสาหกรรม ตัวอย่างเช่น ผู้ผลิตยาเม็ดรับประทานไม่จำเป็นต้องรักษาความสะอาดในระดับเดียวกับผู้ผลิตยาฉีดที่เข้าสู่ร่างกายมนุษย์โดยตรง

ผู้ผลิตยามีความทนทานต่อการปนเปื้อนของจุลินทรีย์ต่ำกว่าผู้ผลิตอุปกรณ์อิเล็กทรอนิกส์ไฮเทค ผู้ผลิตเซมิคอนดักเตอร์ที่ผลิตผลิตภัณฑ์ขนาดเล็กมากไม่สามารถยอมรับการปนเปื้อนของอนุภาคใดๆ เพื่อให้มั่นใจถึงประสิทธิภาพของผลิตภัณฑ์ได้ ดังนั้น บริษัทเหล่านี้จึงให้ความสำคัญเพียงกับความปลอดเชื้อของผลิตภัณฑ์ที่จะฝังในร่างกายมนุษย์และการทำงานของชิปหรือโทรศัพท์มือถือเท่านั้น พวกเขาค่อนข้างกังวลเกี่ยวกับเชื้อรา รา หรือรูปแบบอื่นๆ ของการปนเปื้อนของจุลินทรีย์ในห้องปลอดเชื้อ ในทางกลับกัน บริษัทยากลับกังวลเกี่ยวกับแหล่งกำเนิดการปนเปื้อนทั้งที่มีชีวิตและไร้ชีวิต

อุตสาหกรรมยาอยู่ภายใต้การกำกับดูแลขององค์การอาหารและยา (FDA) และต้องปฏิบัติตามกฎระเบียบว่าด้วยหลักเกณฑ์วิธีการที่ดีในการผลิต (GMP) อย่างเคร่งครัด เนื่องจากผลกระทบจากการปนเปื้อนในอุตสาหกรรมยาเป็นอันตรายอย่างยิ่ง ผู้ผลิตยาไม่เพียงแต่ต้องมั่นใจว่าผลิตภัณฑ์ของตนปราศจากแบคทีเรียเท่านั้น แต่ยังต้องมีเอกสารและการติดตามทุกอย่างด้วย บริษัทอุปกรณ์ไฮเทคสามารถจัดส่งแล็ปท็อปหรือทีวีได้ ตราบใดที่ผ่านการตรวจสอบภายใน แต่สำหรับอุตสาหกรรมยาแล้ว ไม่ใช่เรื่องง่ายนัก ดังนั้น การที่บริษัทต้องมี ใช้งาน และบันทึกขั้นตอนการปฏิบัติงานในห้องคลีนรูมจึงเป็นสิ่งสำคัญอย่างยิ่ง ด้วยข้อจำกัดด้านต้นทุน หลายบริษัทจึงจ้างบริการทำความสะอาดจากผู้เชี่ยวชาญภายนอกมาให้บริการทำความสะอาด

โปรแกรมการทดสอบสภาพแวดล้อมห้องคลีนรูมที่ครอบคลุมควรครอบคลุมทั้งอนุภาคในอากาศที่มองเห็นและมองไม่เห็น แม้ว่าจะไม่มีข้อกำหนดว่าจุลินทรีย์จะต้องระบุสารปนเปื้อนทั้งหมดในสภาพแวดล้อมที่ควบคุมเหล่านี้ โปรแกรมการควบคุมสภาพแวดล้อมควรมีการระบุแบคทีเรียในระดับที่เหมาะสมในการสกัดตัวอย่าง ปัจจุบันมีวิธีการระบุแบคทีเรียหลายวิธี

ขั้นตอนแรกในการระบุแบคทีเรีย โดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อต้องแยกเชื้อในห้องคลีนรูม คือวิธีการย้อมสีแกรม เนื่องจากสามารถให้เบาะแสเชิงตีความถึงแหล่งที่มาของการปนเปื้อนของจุลินทรีย์ได้ หากการแยกและระบุเชื้อจุลินทรีย์พบเชื้อค็อกคัสแกรมบวก การปนเปื้อนอาจมาจากมนุษย์ หากการแยกและระบุเชื้อจุลินทรีย์พบเชื้อแกรมบวกแบบแท่ง การปนเปื้อนอาจมาจากฝุ่นหรือเชื้อดื้อยาฆ่าเชื้อ หากการแยกและระบุเชื้อจุลินทรีย์พบเชื้อแกรมลบแบบแท่ง แหล่งที่มาของการปนเปื้อนอาจมาจากน้ำหรือพื้นผิวที่เปียกชื้น

การระบุจุลินทรีย์ในห้องปลอดเชื้อของยามีความจำเป็นอย่างยิ่ง เนื่องจากเกี่ยวข้องกับหลายแง่มุมของการประกันคุณภาพ เช่น การวิเคราะห์ทางชีวภาพในสภาพแวดล้อมการผลิต การทดสอบระบุแบคทีเรียในผลิตภัณฑ์ขั้นสุดท้าย จุลินทรีย์ที่ไม่มีการระบุชื่อในผลิตภัณฑ์ปลอดเชื้อและน้ำ การควบคุมคุณภาพของเทคโนโลยีการเก็บรักษาในกระบวนการหมักในอุตสาหกรรมเทคโนโลยีชีวภาพ และการตรวจสอบยืนยันการทดสอบจุลินทรีย์ระหว่างการตรวจสอบความถูกต้อง วิธีการขององค์การอาหารและยา (FDA) ในการยืนยันว่าแบคทีเรียสามารถอยู่รอดในสภาพแวดล้อมเฉพาะได้จะแพร่หลายมากขึ้นเรื่อยๆ เมื่อระดับการปนเปื้อนของจุลินทรีย์เกินระดับที่กำหนด หรือผลการทดสอบความปลอดเชื้อบ่งชี้ว่ามีการปนเปื้อน จำเป็นต้องตรวจสอบประสิทธิภาพของสารทำความสะอาดและฆ่าเชื้อ และกำจัดการระบุแหล่งที่มาของการปนเปื้อน

มีสองวิธีในการตรวจติดตามพื้นผิวสิ่งแวดล้อมในห้องคลีนรูม:

1. แผ่นสัมผัส

จานเพาะเชื้อพิเศษเหล่านี้ประกอบด้วยอาหารเลี้ยงเชื้อที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้ว ซึ่งเตรียมไว้ให้สูงกว่าขอบจาน ฝาครอบแผ่นสัมผัสจะครอบพื้นผิวที่จะเก็บตัวอย่าง และจุลินทรีย์ใดๆ ที่มองเห็นได้บนพื้นผิวจะเกาะติดกับพื้นผิวของวุ้นและถูกบ่มเพาะ เทคนิคนี้สามารถแสดงจำนวนจุลินทรีย์ที่มองเห็นได้บนพื้นผิว

2. วิธีการเช็ดด้วยสำลี

ผลิตภัณฑ์นี้ปลอดเชื้อและเก็บไว้ในของเหลวปลอดเชื้อที่เหมาะสม นำสำลีไปวางบนพื้นผิวที่ใช้ทดสอบ และตรวจหาเชื้อจุลินทรีย์โดยการนำสำลีกลับคืนในสารละลาย มักใช้สำลีบนพื้นผิวที่ไม่เรียบหรือในบริเวณที่ยากต่อการสุ่มตัวอย่างด้วยแผ่นสัมผัส การสุ่มตัวอย่างด้วยสำลีเป็นการทดสอบเชิงคุณภาพมากกว่า