ความสำคัญของการระบุแบคทีเรียในห้องคลีนรูม

แหล่งที่มาของการปนเปื้อนในห้องคลีนรูมมีสาเหตุหลักอยู่ 2 แหล่ง ได้แก่ อนุภาคและจุลินทรีย์ซึ่งอาจเกิดจากปัจจัยของมนุษย์และสิ่งแวดล้อม หรือกิจกรรมที่เกี่ยวข้องในกระบวนการ แม้ว่าจะพยายามอย่างเต็มที่แล้ว แต่สิ่งปนเปื้อนก็ยังคงแทรกซึมเข้าไปในห้องปลอดเชื้อได้ พาหะการปนเปื้อนทั่วไปโดยเฉพาะ ได้แก่ ร่างกายมนุษย์ (เซลล์ เส้นผม) ปัจจัยด้านสิ่งแวดล้อม เช่น ฝุ่น ควัน หมอก หรืออุปกรณ์ (อุปกรณ์ในห้องปฏิบัติการ อุปกรณ์ทำความสะอาด) และเทคนิคการเช็ดและวิธีการทำความสะอาดที่ไม่เหมาะสม

พาหะการปนเปื้อนที่พบบ่อยที่สุดคือผู้คน แม้ว่าจะต้องสวมเสื้อผ้าที่เข้มงวดที่สุดและขั้นตอนการปฏิบัติงานที่เข้มงวดที่สุด ผู้ปฏิบัติงานที่ได้รับการฝึกอบรมอย่างไม่เหมาะสมก็ยังเป็นภัยคุกคามที่ใหญ่ที่สุดของการปนเปื้อนในห้องปลอดเชื้อ พนักงานที่ไม่ปฏิบัติตามแนวทางห้องคลีนรูมถือเป็นปัจจัยเสี่ยงสูง ตราบใดที่พนักงานคนหนึ่งทำผิดพลาดหรือลืมขั้นตอนใดขั้นตอนหนึ่ง ก็จะนำไปสู่การปนเปื้อนไปทั่วทั้งคลีนรูม บริษัทสามารถรับประกันความสะอาดของห้องคลีนรูมได้เพียงโดยการติดตามอย่างต่อเนื่องและการปรับปรุงการฝึกอบรมอย่างต่อเนื่องโดยมีอัตราการปนเปื้อนเป็นศูนย์

แหล่งที่มาของการปนเปื้อนที่สำคัญอื่นๆ ได้แก่ เครื่องมือและอุปกรณ์ หากเช็ดรถเข็นหรือเครื่องจักรเพียงคร่าวๆ ก่อนเข้าคลีนรูม ก็อาจมีจุลินทรีย์เข้ามาได้ บ่อยครั้งที่คนงานไม่ทราบว่าอุปกรณ์แบบมีล้อกลิ้งไปบนพื้นผิวที่ปนเปื้อนขณะถูกดันเข้าไปในห้องปลอดเชื้อ พื้นผิว (รวมถึงพื้น ผนัง อุปกรณ์ ฯลฯ) ได้รับการทดสอบเป็นประจำสำหรับการนับที่มีชีวิตโดยใช้แผ่นสัมผัสที่ออกแบบมาเป็นพิเศษซึ่งมีสารการเจริญเติบโต เช่น ทริปติเคสถั่วเหลืองวุ้น (TSA) และ Sabouraud Dextrose Agar (SDA) TSA เป็นสื่อการเจริญเติบโตที่ออกแบบมาสำหรับแบคทีเรีย และ SDA เป็นสื่อการเจริญเติบโตที่ออกแบบมาสำหรับเชื้อราและยีสต์ โดยทั่วไป TSA และ SDA จะถูกบ่มที่อุณหภูมิต่างกัน โดยที่ TSA สัมผัสกับอุณหภูมิในช่วง 30-35°C ซึ่งเป็นอุณหภูมิการเจริญเติบโตที่เหมาะสมที่สุดสำหรับแบคทีเรียส่วนใหญ่ ช่วงอุณหภูมิ 20-25°C เหมาะสมที่สุดสำหรับเชื้อราและยีสต์ส่วนใหญ่

การไหลเวียนของอากาศเคยเป็นสาเหตุของการปนเปื้อนโดยทั่วไป แต่ระบบ HVAC ในห้องคลีนรูมในปัจจุบันสามารถขจัดการปนเปื้อนในอากาศได้อย่างแท้จริง อากาศในห้องสะอาดได้รับการควบคุมและตรวจสอบอย่างสม่ำเสมอ (เช่น รายวัน รายสัปดาห์ รายไตรมาส) สำหรับการนับอนุภาค การนับที่มีชีวิต อุณหภูมิ และความชื้น แผ่นกรอง HEPA ใช้เพื่อควบคุมจำนวนอนุภาคในอากาศและมีความสามารถในการกรองอนุภาคขนาดเล็กถึง 0.2µm โดยปกติตัวกรองเหล่านี้จะทำงานอย่างต่อเนื่องด้วยอัตราการไหลที่ปรับเทียบแล้วเพื่อรักษาคุณภาพอากาศในห้อง โดยปกติความชื้นจะถูกรักษาให้อยู่ในระดับต่ำเพื่อป้องกันการแพร่กระจายของจุลินทรีย์ เช่น แบคทีเรียและเชื้อราที่ชอบสภาพแวดล้อมที่ชื้น

ในความเป็นจริง ระดับสูงสุดและแหล่งที่มาของการปนเปื้อนในห้องปลอดเชื้อที่พบบ่อยที่สุดคือผู้ปฏิบัติงาน

แหล่งที่มาและช่องทางเข้าของการปนเปื้อนไม่ได้แตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญในแต่ละอุตสาหกรรม แต่มีความแตกต่างระหว่างอุตสาหกรรมในแง่ของระดับการปนเปื้อนที่ยอมรับได้และเกินที่ยอมรับได้ ตัวอย่างเช่น ผู้ผลิตยาเม็ดที่รับประทานได้ไม่จำเป็นต้องรักษาความสะอาดในระดับเดียวกับผู้ผลิตยาฉีดที่ฉีดเข้าสู่ร่างกายมนุษย์โดยตรง

ผู้ผลิตยามีความทนทานต่อการปนเปื้อนของจุลินทรีย์ต่ำกว่าผู้ผลิตอิเล็กทรอนิกส์ที่มีเทคโนโลยีสูง ผู้ผลิตเซมิคอนดักเตอร์ที่ผลิตผลิตภัณฑ์ระดับจุลภาคไม่สามารถยอมรับการปนเปื้อนของอนุภาคใดๆ เพื่อรับรองการทำงานของผลิตภัณฑ์ ดังนั้นบริษัทเหล่านี้จึงกังวลเพียงเรื่องความเป็นหมันของผลิตภัณฑ์ที่จะฝังในร่างกายมนุษย์และการทำงานของชิปหรือโทรศัพท์มือถือเท่านั้น พวกเขาค่อนข้างกังวลเกี่ยวกับเชื้อรา เชื้อรา หรือการปนเปื้อนของจุลินทรีย์ในรูปแบบอื่นๆ ในห้องปลอดเชื้อค่อนข้างน้อย ในทางกลับกัน บริษัทยามีความกังวลเกี่ยวกับแหล่งปนเปื้อนที่มีชีวิตและแหล่งที่ตายแล้วทั้งหมด

อุตสาหกรรมยาได้รับการควบคุมโดย FDA และต้องปฏิบัติตามกฎเกณฑ์ Good Manufacturing Practices (GMP) อย่างเคร่งครัด เนื่องจากผลที่ตามมาของการปนเปื้อนในอุตสาหกรรมยาเป็นอันตรายมาก ผู้ผลิตยาไม่เพียงแต่ต้องแน่ใจว่าผลิตภัณฑ์ของตนปราศจากแบคทีเรียเท่านั้น แต่ยังต้องมีเอกสารและการติดตามทุกอย่างอีกด้วย บริษัทอุปกรณ์ไฮเทคสามารถจัดส่งแล็ปท็อปหรือทีวีได้ตราบใดที่ผ่านการตรวจสอบภายใน แต่ไม่ใช่เรื่องง่ายสำหรับอุตสาหกรรมยา ซึ่งเป็นเหตุผลว่าทำไมจึงเป็นสิ่งสำคัญสำหรับบริษัทที่จะต้องมี ใช้ และบันทึกขั้นตอนการปฏิบัติงานของห้องปลอดเชื้อ เนื่องจากการพิจารณาด้านต้นทุน บริษัทหลายแห่งจึงจ้างบริการทำความสะอาดโดยมืออาชีพจากภายนอกเพื่อให้บริการทำความสะอาด

โปรแกรมการทดสอบสภาพแวดล้อมในห้องสะอาดที่ครอบคลุมควรรวมอนุภาคในอากาศที่มองเห็นและมองไม่เห็น แม้ว่าจะไม่มีข้อกำหนดให้จุลินทรีย์ระบุสิ่งปนเปื้อนทั้งหมดในสภาพแวดล้อมที่ได้รับการควบคุมเหล่านี้ โปรแกรมการควบคุมสิ่งแวดล้อมควรรวมการระบุแบคทีเรียในการสกัดตัวอย่างในระดับที่เหมาะสม ปัจจุบันมีวิธีการระบุแบคทีเรียหลายวิธี

ขั้นตอนแรกในการระบุแบคทีเรีย โดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อต้องแยกออกจากห้องปลอดเชื้อ คือวิธีการย้อมสีแกรม เนื่องจากสามารถให้เบาะแสที่สื่อความหมายถึงแหล่งที่มาของการปนเปื้อนของจุลินทรีย์ได้ หากการแยกและจำแนกจุลินทรีย์แสดง cocci แกรมบวก แสดงว่าการปนเปื้อนอาจมาจากมนุษย์ หากการแยกและระบุจุลินทรีย์แสดงแท่งแกรมบวก แสดงว่าการปนเปื้อนอาจมาจากสายพันธุ์ที่ทนต่อฝุ่นหรือสารฆ่าเชื้อ หากการแยกและจำแนกจุลินทรีย์แสดงให้เห็นแท่งแกรมลบ แหล่งที่มาของการปนเปื้อนอาจมาจากน้ำหรือพื้นผิวเปียก

การบ่งชี้จุลินทรีย์ในห้องปลอดเชื้อทางเภสัชกรรมถือเป็นสิ่งสำคัญมาก เนื่องจากเกี่ยวข้องกับหลายแง่มุมของการประกันคุณภาพ เช่น การตรวจวิเคราะห์ทางชีวภาพในสภาพแวดล้อมการผลิต การทดสอบการระบุแบคทีเรียของผลิตภัณฑ์ขั้นสุดท้าย สิ่งมีชีวิตที่ไม่ระบุชื่อในผลิตภัณฑ์และน้ำปลอดเชื้อ การควบคุมคุณภาพของเทคโนโลยีการจัดเก็บการหมักในอุตสาหกรรมเทคโนโลยีชีวภาพ และการตรวจสอบการทดสอบจุลินทรีย์ระหว่างการตรวจสอบ วิธีการของ FDA ในการยืนยันว่าแบคทีเรียสามารถอยู่รอดได้ในสภาพแวดล้อมที่เฉพาะเจาะจงจะมีมากขึ้นเรื่อยๆ เมื่อระดับการปนเปื้อนของจุลินทรีย์เกินระดับที่กำหนดหรือผลการทดสอบความเป็นหมันบ่งชี้การปนเปื้อน จำเป็นต้องตรวจสอบประสิทธิภาพของสารทำความสะอาดและฆ่าเชื้อ และกำจัดการระบุแหล่งที่มาของการปนเปื้อน

มีสองวิธีในการตรวจสอบพื้นผิวสิ่งแวดล้อมในห้องปลอดเชื้อ:

1. แผ่นสัมผัส

อาหารเพาะเลี้ยงพิเศษเหล่านี้มีอาหารเลี้ยงเชื้อปลอดเชื้อซึ่งเตรียมไว้ให้สูงกว่าขอบจาน ฝาครอบแผ่นสัมผัสครอบคลุมพื้นผิวที่ต้องการเก็บตัวอย่าง และจุลินทรีย์ใดๆ ที่มองเห็นได้บนพื้นผิวจะเกาะติดกับพื้นผิววุ้นและฟักตัว เทคนิคนี้สามารถแสดงจำนวนจุลินทรีย์ที่มองเห็นได้บนพื้นผิว

2. วิธีการเช็ด

ผ่านการฆ่าเชื้อและเก็บไว้ในของเหลวที่ผ่านการฆ่าเชื้อที่เหมาะสม ไม้กวาดจะถูกนำไปใช้กับพื้นผิวทดสอบ และจุลินทรีย์จะถูกระบุโดยการนำไม้กวาดกลับคืนมาในตัวกลาง มักใช้สำลีบนพื้นผิวที่ไม่เรียบหรือในพื้นที่ที่ยากต่อการเก็บตัวอย่างด้วยแผ่นสัมผัส การสุ่มตัวอย่างด้วยไม้กวาดเป็นการทดสอบเชิงคุณภาพมากกว่า