ขั้นตอนการกำหนดมาตรฐานห้องปลอดเชื้อและข้อกำหนดการยอมรับ

1. วัตถุประสงค์: ขั้นตอนนี้มีจุดมุ่งหมายเพื่อให้เป็นขั้นตอนมาตรฐานสำหรับการปฏิบัติงานปลอดเชื้อและการปกป้องห้องปลอดเชื้อ

2. ขอบเขตการใช้งาน: ห้องปฏิบัติการทดสอบทางชีวภาพ

3. ผู้รับผิดชอบ: หัวหน้างานทดสอบควบคุมคุณภาพ

4. คำจำกัดความ: ไม่มี

5. ข้อควรระวังด้านความปลอดภัย

ปฏิบัติงานโดยใช้หลักการปลอดเชื้ออย่างเคร่งครัดเพื่อป้องกันการปนเปื้อนของจุลินทรีย์ ผู้ปฏิบัติงานควรปิดหลอดไฟ UV ก่อนเข้าห้องปลอดเชื้อ

6. ขั้นตอน

6.1. ห้องปลอดเชื้อควรประกอบด้วยห้องผ่าตัดปลอดเชื้อและห้องบัฟเฟอร์ ความสะอาดของห้องผ่าตัดปลอดเชื้อควรอยู่ในระดับ 10000 อุณหภูมิภายในห้องควรอยู่ที่ 20-24°C และความชื้นควรอยู่ที่ 45-60% ความสะอาดของโต๊ะผ่าตัดปลอดเชื้อควรอยู่ในระดับ 100

6.2. ห้องปลอดเชื้อควรได้รับการดูแลรักษาให้สะอาด และห้ามมิให้กองสิ่งของหรือวัสดุใดๆ ไว้โดยเด็ดขาด เพื่อป้องกันการปนเปื้อน

6.3. ป้องกันการปนเปื้อนของอุปกรณ์ฆ่าเชื้อและอาหารเลี้ยงเชื้ออย่างเคร่งครัด อุปกรณ์ใดที่ปนเปื้อนแล้วควรหยุดใช้งานทันที

6.4. ห้องปลอดเชื้อควรมีน้ำยาฆ่าเชื้อที่มีความเข้มข้นเหมาะสม เช่น สารละลายครีซอล 5%, แอลกอฮอล์ 70%, สารละลายคลอร์เมไทโอนีน 0.1% เป็นต้น

6.5. ห้องปลอดเชื้อควรได้รับการฆ่าเชื้อและทำความสะอาดอย่างสม่ำเสมอด้วยน้ำยาฆ่าเชื้อที่เหมาะสม เพื่อให้มั่นใจว่าความสะอาดของห้องปลอดเชื้อเป็นไปตามข้อกำหนด

6.6. อุปกรณ์ เครื่องมือ จาน และสิ่งของอื่นๆ ทั้งหมดที่จำเป็นต้องนำเข้าห้องปลอดเชื้อ ควรห่อให้มิดชิดและฆ่าเชื้อด้วยวิธีการที่เหมาะสม

6.7. ก่อนเข้าห้องปลอดเชื้อ พนักงานต้องล้างมือด้วยสบู่หรือน้ำยาฆ่าเชื้อ แล้วเปลี่ยนเป็นชุดทำงานพิเศษ รองเท้า หมวก หน้ากาก และถุงมือในห้องเตรียมอุปกรณ์ (หรือเช็ดมืออีกครั้งด้วยเอทานอล 70%) ก่อนเข้าห้องปลอดเชื้อ และทำการผ่าตัดในห้องฆ่าเชื้อแบคทีเรีย

6.8. ก่อนใช้งานห้องปลอดเชื้อ ต้องเปิดหลอดไฟอัลตราไวโอเลตในห้องปลอดเชื้อเพื่อฉายแสงและฆ่าเชื้อนานกว่า 30 นาที และต้องเปิดเครื่องเป่าลมในโต๊ะทำความสะอาดพร้อมกันด้วย หลังจากเสร็จสิ้นการทำงานแล้ว ควรทำความสะอาดห้องปลอดเชื้อให้เรียบร้อย แล้วจึงฆ่าเชื้อด้วยแสงอัลตราไวโอเลตอีก 20 นาที

6.9. ก่อนการตรวจสอบ บรรจุภัณฑ์ภายนอกของตัวอย่างทดสอบควรอยู่ในสภาพสมบูรณ์และห้ามเปิดเพื่อป้องกันการปนเปื้อน ก่อนการตรวจสอบ ให้ใช้สำลีชุบแอลกอฮอล์ 70% เช็ดทำความสะอาดพื้นผิวด้านนอก

6.10. ในระหว่างการดำเนินการแต่ละครั้ง ควรทำการทดสอบควบคุมเชิงลบเพื่อตรวจสอบความน่าเชื่อถือของการดำเนินการแบบปลอดเชื้อ

6.11. เมื่อดูดของเหลวจากแบคทีเรีย ต้องใช้ลูกดูดช่วยดูด ห้ามเอาปลายหลอดดูดเข้าปากโดยตรง

6.12. เข็มสำหรับเพาะเชื้อต้องผ่านการฆ่าเชื้อด้วยเปลวไฟก่อนและหลังการใช้งานทุกครั้ง หลังจากเย็นตัวลงแล้ว จึงจะสามารถเพาะเชื้อได้

6.13. หลอดดูด หลอดทดลอง จานเพาะเชื้อ และอุปกรณ์อื่นๆ ที่บรรจุของเหลวที่มีแบคทีเรีย ควรแช่ในถังฆ่าเชื้อที่มีสารละลายไลซอล 5% เพื่อฆ่าเชื้อโรค และนำออกมาล้างออกหลังจาก 24 ชั่วโมง

6.14. หากมีของเหลวที่มีเชื้อแบคทีเรียหกบนโต๊ะหรือพื้น ควรเทสารละลายกรดคาร์โบลิก 5% หรือไลซอล 3% ลงบนบริเวณที่ปนเปื้อนทันที และทิ้งไว้อย่างน้อย 30 นาทีก่อนทำการรักษา เมื่อเสื้อผ้าและหมวกทำงานปนเปื้อนด้วยของเหลวที่มีเชื้อแบคทีเรีย ควรถอดออกทันทีและซักหลังจากฆ่าเชื้อด้วยไอน้ำแรงดันสูงแล้ว

6.15. สิ่งของทุกชนิดที่มีแบคทีเรียมีชีวิตอยู่จะต้องได้รับการฆ่าเชื้อก่อนนำไปล้างด้วยน้ำประปา ห้ามทิ้งสิ่งของลงในท่อระบายน้ำโดยเด็ดขาด

6.16. ควรตรวจสอบจำนวนโคโลนีในห้องปลอดเชื้อทุกเดือน เมื่อเปิดโต๊ะสะอาดแล้ว ให้นำจานเพาะเชื้อปลอดเชื้อที่มีเส้นผ่านศูนย์กลางภายใน 90 มม. จำนวนหนึ่งมา แล้วเติมอาหารเลี้ยงเชื้อแบบวุ้นที่ละลายและเย็นตัวลงแล้วประมาณ 15 มล. ลงไปอย่างปลอดเชื้อ หลังจากแข็งตัวแล้ว ให้คว่ำจานเพาะเชื้อลงในตู้อบที่อุณหภูมิ 30-35 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 48 ชั่วโมง หลังจากตรวจสอบความปลอดเชื้อแล้ว ให้นำจานเพาะเชื้อ 3-5 จานมาวางไว้ทางด้านซ้าย กลาง และขวาของตำแหน่งการทำงาน หลังจากเปิดฝาและทิ้งไว้ 30 นาที ให้คว่ำจานเพาะเชื้อลงในตู้อบที่อุณหภูมิ 30-35 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 48 ชั่วโมง แล้วนำออกมาตรวจสอบ จำนวนแบคทีเรียโดยเฉลี่ยบนจานเพาะเชื้อในพื้นที่สะอาดระดับ 100 จะต้องไม่เกิน 1 โคโลนี และจำนวนโดยเฉลี่ยในห้องสะอาดระดับ 10000 จะต้องไม่เกิน 3 โคโลนี หากเกินขีดจำกัด ห้องปลอดเชื้อจะต้องได้รับการฆ่าเชื้ออย่างทั่วถึงจนกว่าการตรวจสอบซ้ำจะตรงตามข้อกำหนด

7. โปรดดูบท (วิธีการตรวจสอบความปลอดเชื้อ) ใน "วิธีการตรวจสอบสุขอนามัยยา" และ "มาตรฐานการปฏิบัติงานของจีนสำหรับการตรวจสอบยา"

8. ฝ่ายจัดจำหน่าย: ฝ่ายบริหารคุณภาพ

คำแนะนำทางเทคนิคสำหรับห้องปลอดเชื้อ:

หลังจากได้สภาพแวดล้อมและวัสดุที่ปลอดเชื้อแล้ว เราต้องรักษาความปลอดเชื้อนั้นไว้เพื่อศึกษาจุลินทรีย์ชนิดใดชนิดหนึ่ง หรือเพื่อใช้ประโยชน์จากหน้าที่ของมัน มิเช่นนั้น จุลินทรีย์ต่างๆ จากภายนอกอาจปะปนเข้ามาได้ง่าย ปรากฏการณ์การปะปนของจุลินทรีย์ที่ไม่เกี่ยวข้องจากภายนอกนี้ ในทางจุลชีววิทยาเรียกว่า แบคทีเรียปนเปื้อน การป้องกันการปนเปื้อนเป็นเทคนิคที่สำคัญยิ่งในงานด้านจุลชีววิทยา การฆ่าเชื้ออย่างสมบูรณ์ในด้านหนึ่ง และการป้องกันการปนเปื้อนในอีกด้านหนึ่ง เป็นสองด้านของเทคนิคปลอดเชื้อ นอกจากนี้ เราต้องป้องกันไม่ให้จุลินทรีย์ที่กำลังศึกษา โดยเฉพาะจุลินทรีย์ก่อโรค หรือจุลินทรีย์ดัดแปลงพันธุกรรมที่ไม่พบในธรรมชาติ หลุดออกจากภาชนะทดลองของเราไปสู่สิ่งแวดล้อมภายนอก เพื่อจุดประสงค์เหล่านี้ ในทางจุลชีววิทยาจึงมีมาตรการมากมาย

ห้องปลอดเชื้อโดยทั่วไปเป็นห้องขนาดเล็กที่จัดเตรียมไว้เป็นพิเศษในห้องปฏิบัติการจุลชีววิทยา สามารถสร้างได้ด้วยแผ่นโลหะและกระจก พื้นที่ไม่ควรใหญ่เกินไป ประมาณ 4-5 ตารางเมตร และความสูงควรอยู่ที่ประมาณ 2.5 เมตร ควรจัดตั้งห้องกันชนไว้ด้านนอกห้องปลอดเชื้อ ประตูของห้องกันชนและประตูของห้องปลอดเชื้อไม่ควรหันไปในทิศทางเดียวกันเพื่อป้องกันไม่ให้กระแสลมพัดพาแบคทีเรียต่าง ๆ เข้ามา ทั้งห้องปลอดเชื้อและห้องกันชนต้องปิดสนิท อุปกรณ์ระบายอากาศภายในอาคารต้องมีอุปกรณ์กรองอากาศ พื้นและผนังของห้องปลอดเชื้อต้องเรียบ ยากต่อการสะสมสิ่งสกปรกและทำความสะอาดง่าย พื้นผิวการทำงานควรเรียบเสมอกัน ทั้งห้องปลอดเชื้อและห้องกันชนต้องติดตั้งไฟอัลตราไวโอเลต ไฟอัลตราไวโอเลตในห้องปลอดเชื้ออยู่ห่างจากพื้นผิวการทำงาน 1 เมตร บุคลากรที่เข้าห้องปลอดเชื้อควรสวมเสื้อผ้าและหมวกที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้ว

ปัจจุบัน ห้องปลอดเชื้อส่วนใหญ่พบในโรงงานจุลชีววิทยา ในขณะที่ห้องปฏิบัติการทั่วไปใช้โต๊ะคลีนเบนช์ หน้าที่หลักของโต๊ะคลีนเบนช์คือการใช้เครื่องกรองอากาศแบบไหลเวียนราบเรียบเพื่อกำจัดฝุ่นละอองขนาดเล็กต่างๆ รวมถึงจุลินทรีย์บนพื้นผิวการทำงาน อุปกรณ์ไฟฟ้าจะปล่อยอากาศผ่านแผ่นกรอง HEPA แล้วเข้าสู่พื้นผิวการทำงาน ทำให้พื้นผิวการทำงานอยู่ภายใต้การควบคุมของอากาศปลอดเชื้ออยู่เสมอ นอกจากนี้ยังมีม่านอากาศความเร็วสูงอยู่ด้านข้างใกล้กับด้านนอกเพื่อป้องกันไม่ให้อากาศที่มีแบคทีเรียจากภายนอกเข้ามา

ในสถานที่ที่มีสภาพแวดล้อมยากลำบาก กล่องฆ่าเชื้อไม้ก็สามารถใช้แทนโต๊ะสะอาดได้ กล่องฆ่าเชื้อมีโครงสร้างที่เรียบง่ายและเคลื่อนย้ายได้ง่าย มีรูสองรูอยู่ด้านหน้าของกล่อง ซึ่งจะถูกปิดด้วยประตูแบบดึงเมื่อไม่ใช้งาน คุณสามารถสอดแขนเข้าไปได้ขณะใช้งาน ส่วนบนของด้านหน้ามีกระจกเพื่ออำนวยความสะดวกในการใช้งานภายใน มีหลอดไฟอัลตราไวโอเลตอยู่ภายในกล่อง และสามารถใส่เครื่องมือและแบคทีเรียเข้าไปได้ทางประตูเล็กๆ ด้านข้าง

เทคนิคการปฏิบัติงานแบบปลอดเชื้อในปัจจุบันไม่เพียงแต่มีบทบาทสำคัญในการวิจัยและการประยุกต์ใช้ทางจุลชีววิทยาเท่านั้น แต่ยังถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายในเทคโนโลยีชีวภาพหลายแขนง ตัวอย่างเช่น เทคโนโลยีการดัดแปลงพันธุกรรม เทคโนโลยีแอนติบอดีโมโนโคลนอล เป็นต้น