ขั้นตอนมาตรฐานห้องปลอดเชื้อและข้อกำหนดการยอมรับ

1. วัตถุประสงค์: ขั้นตอนนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อให้มีขั้นตอนมาตรฐานสำหรับการดำเนินการปลอดเชื้อและการปกป้องห้องปลอดเชื้อ

2. ขอบเขตการใช้งาน: ห้องปฏิบัติการทดสอบทางชีวภาพ

3. ผู้รับผิดชอบ: QC Supervisor Tester

4.คำจำกัดความ: ไม่มี

5. ข้อควรระวังด้านความปลอดภัย

ดำเนินการปลอดเชื้ออย่างเคร่งครัดเพื่อป้องกันการปนเปื้อนของจุลินทรีย์ ผู้ปฏิบัติงานควรปิดหลอด UV ก่อนเข้าห้องปลอดเชื้อ

6.ขั้นตอนการดำเนินการ

6.1 ห้องปลอดเชื้อควรมีห้องปฏิบัติการปลอดเชื้อและห้องบัฟเฟอร์ ความสะอาดของห้องปฏิบัติการปลอดเชื้อควรอยู่ในระดับ 10,000 อุณหภูมิภายในห้องควรอยู่ที่ 20-24 องศาเซลเซียส และความชื้นสัมพัทธ์ควรอยู่ที่ 45-60% ความสะอาดของม้านั่งสะอาดควรอยู่ในระดับ 100

6.2. ห้องปลอดเชื้อควรได้รับการทำความสะอาด และห้ามมิให้มีเศษวัสดุกองรวมกันโดยเด็ดขาดเพื่อป้องกันการปนเปื้อน

6.3 ป้องกันการปนเปื้อนของอุปกรณ์ฆ่าเชื้อและอาหารเลี้ยงเชื้อทุกชนิดอย่างเคร่งครัด ผู้ที่ปนเปื้อนควรหยุดใช้อุปกรณ์ดังกล่าว

6.4 ห้องปลอดเชื้อควรมีน้ำยาฆ่าเชื้อความเข้มข้นที่เหมาะสมในการทำงาน เช่น สารละลายครีซอล 5% แอลกอฮอล์ 70% สารละลายคลอร์เมไทโอนีน 0.1% เป็นต้น

6.5. ห้องปลอดเชื้อควรได้รับการฆ่าเชื้อและทำความสะอาดด้วยน้ำยาฆ่าเชื้อที่เหมาะสมเป็นประจำเพื่อให้แน่ใจว่าความสะอาดของห้องปลอดเชื้อเป็นไปตามข้อกำหนด

6.6. เครื่องมือ อุปกรณ์ จาน ชาม และสิ่งของอื่นๆ ทั้งหมดที่จำเป็นต้องนำเข้าห้องปลอดเชื้อ ควรห่อให้แน่นหนาและผ่านการฆ่าเชื้อด้วยวิธีการที่เหมาะสม

6.7 ก่อนเข้าห้องปลอดเชื้อ พนักงานต้องล้างมือด้วยสบู่หรือน้ำยาฆ่าเชื้อ จากนั้นเปลี่ยนชุดทำงาน รองเท้า หมวก หน้ากาก และถุงมือในห้องบัฟเฟอร์ (หรือเช็ดมืออีกครั้งด้วยเอทานอล 70%) ก่อนเข้าห้องปลอดเชื้อ ปฏิบัติงานในห้องฆ่าเชื้อแบคทีเรีย

6.8 ก่อนใช้งานห้องปลอดเชื้อ ต้องเปิดหลอดอัลตราไวโอเลตในห้องปลอดเชื้อเพื่อฉายรังสีและฆ่าเชื้อนานกว่า 30 นาที และเปิดพัดลมเป่าที่โต๊ะทำความสะอาดด้วย หลังจากเสร็จสิ้นการใช้งาน ควรทำความสะอาดห้องปลอดเชื้อให้เรียบร้อยก่อน แล้วจึงฆ่าเชื้อด้วยแสงอัลตราไวโอเลตเป็นเวลา 20 นาที

6.9. ก่อนการตรวจสอบ ควรเก็บบรรจุภัณฑ์ภายนอกของตัวอย่างทดสอบให้อยู่ในสภาพสมบูรณ์และห้ามเปิดออกเพื่อป้องกันการปนเปื้อน ก่อนการตรวจสอบ ให้ใช้สำลีแอลกอฮอล์ 70% เช็ดทำความสะอาดพื้นผิวภายนอก

6.10. ในระหว่างการดำเนินการแต่ละครั้ง ควรมีการควบคุมเชิงลบเพื่อตรวจสอบความน่าเชื่อถือของการดำเนินการปลอดเชื้อ

6.11. เมื่อดูดซับของเหลวแบคทีเรีย ต้องใช้ลูกบอลดูดเพื่อดูดซับ อย่าใช้ปากสัมผัสหลอดดูดโดยตรง

6.12. ต้องฆ่าเชื้อเข็มฉีดยาด้วยเปลวไฟก่อนและหลังการใช้งานทุกครั้ง หลังจากเย็นตัวลงแล้ว จึงสามารถเพาะเชื้อได้

6.13. ควรแช่หลอด หลอดทดลอง จานเพาะเชื้อ และอุปกรณ์อื่นๆ ที่มีของเหลวแบคทีเรียในถังฆ่าเชื้อที่มีสารละลายไลซอล 5% เพื่อฆ่าเชื้อโรค จากนั้นนำออกและล้างออกหลังจากผ่านไป 24 ชั่วโมง

6.14 หากมีของเหลวแบคทีเรียหกบนโต๊ะหรือพื้น ควรเทสารละลายกรดคาร์โบลิก 5% หรือไลซอล 3% ลงบนบริเวณที่ปนเปื้อนทันทีเป็นเวลาอย่างน้อย 30 นาทีก่อนดำเนินการบำบัด หากเสื้อผ้าและหมวกทำงานปนเปื้อนของเหลวแบคทีเรีย ควรถอดออกทันทีและซักล้างหลังจากฆ่าเชื้อด้วยไอน้ำแรงดันสูง

6.15. สิ่งของทุกชิ้นที่มีแบคทีเรียมีชีวิตต้องได้รับการฆ่าเชื้อก่อนนำไปล้างใต้ก๊อกน้ำ ห้ามมิให้ปนเปื้อนลงในท่อระบายน้ำโดยเด็ดขาด

6.16 ควรตรวจสอบจำนวนโคโลนีในห้องปลอดเชื้อทุกเดือน เปิดถาดเพาะเชื้อที่สะอาด นำจานเพาะเชื้อที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้วจำนวนหนึ่ง ซึ่งมีเส้นผ่านศูนย์กลางภายใน 90 มิลลิเมตร ฉีดอาหารเลี้ยงเชื้อวุ้นที่ละลายและทำให้เย็นลงประมาณ 45 องศาเซลเซียส ประมาณ 15 มิลลิลิตร หลังจากแข็งตัวแล้ว ให้คว่ำจานเพาะเชื้อลงที่อุณหภูมิ 30-35 องศาเซลเซียส บ่มเพาะเป็นเวลา 48 ชั่วโมงในตู้เพาะเชื้อ หลังจากพิสูจน์ความปลอดเชื้อแล้ว ให้นำจานเพาะเชื้อ 3-5 แผ่น วางเรียงไว้ทางด้านซ้าย ตรงกลาง และด้านขวาของตำแหน่งทำงาน หลังจากเปิดฝาและทิ้งไว้ 30 นาที ให้คว่ำจานเพาะเชื้อลงในตู้เพาะเชื้อที่อุณหภูมิ 30-35 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 48 ชั่วโมง แล้วนำออกจากตู้เพาะเชื้อ ตรวจสอบ จำนวนแบคทีเรียชนิดต่างๆ บนจานเพาะเชื้อโดยเฉลี่ยในพื้นที่สะอาดระดับ 100 จะต้องไม่เกิน 1 โคโลนี และจำนวนแบคทีเรียเฉลี่ยในห้องสะอาดระดับ 10000 จะต้องไม่เกิน 3 โคโลนี หากเกินขีดจำกัด ควรฆ่าเชื้อห้องปลอดเชื้อให้ทั่วถึงจนกว่าการตรวจสอบซ้ำหลายครั้งจะตรงตามข้อกำหนด

7. อ้างอิงบท (วิธีการตรวจสอบความปลอดเชื้อ) ใน “วิธีการตรวจสอบสุขอนามัยของยา” และ “แนวทางปฏิบัติมาตรฐานของจีนสำหรับการตรวจสอบยา”

8. ฝ่ายจัดจำหน่าย : ฝ่ายบริหารคุณภาพ

คำแนะนำทางเทคนิคห้องคลีนรูม:

หลังจากได้รับสภาพแวดล้อมปลอดเชื้อและวัสดุปลอดเชื้อแล้ว เราต้องรักษาสภาวะปลอดเชื้อไว้เพื่อศึกษาจุลินทรีย์เฉพาะที่รู้จักหรือใช้ประโยชน์จากการทำงานของจุลินทรีย์เหล่านั้น มิฉะนั้น จุลินทรีย์ต่างๆ จากภายนอกอาจปะปนกันได้ง่าย ปรากฏการณ์การผสมของจุลินทรีย์ที่ไม่เกี่ยวข้องจากภายนอกเรียกว่าการปนเปื้อนของแบคทีเรียในจุลชีววิทยา การป้องกันการปนเปื้อนเป็นเทคนิคสำคัญในงานจุลชีววิทยา การฆ่าเชื้ออย่างสมบูรณ์ในด้านหนึ่งและการป้องกันการปนเปื้อนในอีกด้านหนึ่งเป็นสองแง่มุมของเทคนิคปลอดเชื้อ นอกจากนี้ เราต้องป้องกันไม่ให้จุลินทรีย์ที่กำลังศึกษาอยู่ โดยเฉพาะอย่างยิ่งจุลินทรีย์ก่อโรคหรือจุลินทรีย์ดัดแปลงพันธุกรรมที่ไม่มีอยู่ในธรรมชาติ หลุดรอดจากภาชนะบรรจุที่เราทดลองออกสู่สภาพแวดล้อมภายนอก เพื่อจุดประสงค์นี้ ในทางจุลชีววิทยาจึงมีมาตรการมากมาย

ห้องปลอดเชื้อมักเป็นห้องขนาดเล็กที่จัดไว้เป็นพิเศษในห้องปฏิบัติการจุลชีววิทยา สามารถสร้างด้วยแผ่นและกระจกได้ พื้นที่ไม่ควรใหญ่เกินไป ประมาณ 4-5 ตารางเมตร และความสูงควรประมาณ 2.5 เมตร ควรจัดห้องบัฟเฟอร์ไว้ด้านนอกห้องปลอดเชื้อ ประตูห้องบัฟเฟอร์และประตูห้องปลอดเชื้อไม่ควรหันไปทางเดียวกันเพื่อป้องกันการไหลเวียนของอากาศจากแบคทีเรียต่างๆ ทั้งห้องปลอดเชื้อและห้องบัฟเฟอร์ต้องปิดสนิท อุปกรณ์ระบายอากาศภายในอาคารต้องมีอุปกรณ์กรองอากาศ พื้นและผนังห้องปลอดเชื้อต้องเรียบ ยากต่อการกักเก็บสิ่งสกปรก และทำความสะอาดง่าย พื้นผิวการทำงานต้องเรียบเสมอกัน ทั้งห้องปลอดเชื้อและห้องบัฟเฟอร์ต้องติดตั้งหลอดอัลตราไวโอเลต โดยหลอดอัลตราไวโอเลตในห้องปลอดเชื้อต้องอยู่ห่างจากพื้นผิวการทำงาน 1 เมตร เจ้าหน้าที่ที่เข้าไปในห้องปลอดเชื้อควรสวมเสื้อผ้าและหมวกที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้ว

ปัจจุบันห้องปลอดเชื้อส่วนใหญ่อยู่ในโรงงานจุลชีววิทยา ขณะที่ห้องปฏิบัติการทั่วไปใช้ห้องปลอดเชื้อ หน้าที่หลักของห้องปลอดเชื้อคือการใช้อุปกรณ์ไหลเวียนอากาศแบบลามินาร์เพื่อกำจัดฝุ่นขนาดเล็กต่างๆ รวมถึงจุลินทรีย์บนพื้นผิวการทำงาน อุปกรณ์นี้ช่วยให้อากาศผ่านแผ่นกรอง HEPA และเข้าสู่พื้นผิวการทำงาน ทำให้พื้นผิวการทำงานอยู่ภายใต้การควบคุมของอากาศปลอดเชื้อที่ไหลเวียนอยู่ตลอดเวลา ยิ่งไปกว่านั้น ยังมีม่านอากาศความเร็วสูงที่ด้านข้างใกล้กับด้านนอก เพื่อป้องกันอากาศจากแบคทีเรียจากภายนอกไม่ให้เข้าสู่พื้นผิวการทำงาน

ในสถานที่ที่มีสภาพแวดล้อมที่ยากลำบาก สามารถใช้กล่องฆ่าเชื้อที่ทำจากไม้แทนม้านั่งทำความสะอาดได้ กล่องฆ่าเชื้อมีโครงสร้างเรียบง่ายและเคลื่อนย้ายสะดวก ด้านหน้ากล่องมีรูสองรู ซึ่งจะถูกปิดด้วยประตูแบบผลัก-ดึงเมื่อไม่ได้ใช้งาน คุณสามารถยื่นแขนเข้าไปได้ขณะใช้งาน ส่วนบนของด้านหน้ามีกระจกเพื่ออำนวยความสะดวกในการใช้งานภายใน ภายในกล่องมีหลอดไฟอัลตราไวโอเลต และสามารถใส่ภาชนะและแบคทีเรียผ่านประตูเล็กๆ ด้านข้างได้

ปัจจุบันเทคนิคการดำเนินงานแบบปลอดเชื้อไม่เพียงแต่มีบทบาทสำคัญในการวิจัยและการประยุกต์ใช้ทางจุลชีววิทยาเท่านั้น แต่ยังถูกนำมาใช้อย่างแพร่หลายในเทคโนโลยีชีวภาพมากมาย เช่น เทคโนโลยีทรานส์เจนิก เทคโนโลยีโมโนโคลนอลแอนติบอดี เป็นต้น