ขั้นตอนมาตรฐานของห้องปลอดเชื้อและข้อกำหนดการยอมรับ

1. วัตถุประสงค์: ขั้นตอนนี้มีจุดมุ่งหมายเพื่อให้ขั้นตอนที่เป็นมาตรฐานสำหรับการปฏิบัติงานปลอดเชื้อและการป้องกันห้องปลอดเชื้อ

2. ขอบเขตการใช้งาน: ห้องปฏิบัติการทดสอบทางชีววิทยา

3. ผู้รับผิดชอบ: ผู้ทดสอบหัวหน้าฝ่ายควบคุมคุณภาพ

4.คำจำกัดความ: ไม่มี

5. ข้อควรระวังด้านความปลอดภัย

ดำเนินการปลอดเชื้ออย่างเคร่งครัดเพื่อป้องกันการปนเปื้อนของจุลินทรีย์ผู้ปฏิบัติงานควรปิดหลอด UV ก่อนเข้าห้องปลอดเชื้อ

6.ขั้นตอนปฏิบัติ

6.1.ห้องปลอดเชื้อควรมีห้องผ่าตัดปลอดเชื้อและห้องบัฟเฟอร์ความสะอาดของห้องผ่าตัดปลอดเชื้อควรอยู่ที่ระดับ 10,000 ควรรักษาอุณหภูมิภายในอาคารไว้ที่ 20-24°C และควรรักษาความชื้นไว้ที่ 45-60%ความสะอาดของม้านั่งที่สะอาดควรอยู่ที่ระดับ 100

6.2.ห้องปลอดเชื้อควรรักษาความสะอาด และห้ามมิให้กองเศษซากเพื่อป้องกันการปนเปื้อนโดยเด็ดขาด

6.3.ป้องกันการปนเปื้อนของอุปกรณ์ฆ่าเชื้อและสารเพาะเลี้ยงทั้งหมดอย่างเคร่งครัดผู้ที่มีสารปนเปื้อนควรหยุดใช้

6.4.ห้องปลอดเชื้อควรติดตั้งน้ำยาฆ่าเชื้อที่มีความเข้มข้นในการทำงาน เช่น สารละลายเครซอล 5% แอลกอฮอล์ 70% สารละลายคลอร์เมไทโอนีน 0.1% เป็นต้น

6.5.ห้องปลอดเชื้อควรได้รับการฆ่าเชื้ออย่างสม่ำเสมอและทำความสะอาดด้วยน้ำยาฆ่าเชื้อที่เหมาะสมเพื่อให้แน่ใจว่าความสะอาดของห้องปลอดเชื้อเป็นไปตามข้อกำหนด

6.6.เครื่องมือ เครื่องมือ จานและสิ่งของอื่น ๆ ทั้งหมดที่จำเป็นต้องนำเข้าห้องปลอดเชื้อควรห่อให้แน่นและฆ่าเชื้อด้วยวิธีการที่เหมาะสม

6.7.ก่อนเข้าห้องปลอดเชื้อ พนักงานต้องล้างมือด้วยสบู่หรือน้ำยาฆ่าเชื้อ จากนั้นจึงเปลี่ยนชุดทำงานพิเศษ รองเท้า หมวก หน้ากาก และถุงมือ ในห้องบัฟเฟอร์ (หรือเช็ดมืออีกครั้งด้วยเอธานอล 70%) ก่อนเข้าห้องปลอดเชื้อดำเนินการในห้องแบคทีเรีย

6.8.ก่อนใช้ห้องปลอดเชื้อต้องเปิดหลอดอัลตราไวโอเลตในห้องปลอดเชื้อเพื่อฉายรังสีและฆ่าเชื้อเป็นเวลานานกว่า 30 นาที และต้องเปิดม้านั่งที่สะอาดเพื่อให้เป่าลมไปพร้อมๆ กันหลังจากดำเนินการเสร็จสิ้น ควรทำความสะอาดห้องปลอดเชื้อให้ทันเวลา จากนั้นจึงฆ่าเชื้อด้วยแสงอัลตราไวโอเลตเป็นเวลา 20 นาที

6.9.ก่อนการตรวจสอบ บรรจุภัณฑ์ด้านนอกของตัวอย่างทดสอบควรอยู่ในสภาพสมบูรณ์และต้องไม่เปิดออกเพื่อป้องกันการปนเปื้อนก่อนการตรวจสอบ ให้ใช้สำลีแอลกอฮอล์ 70% ฆ่าเชื้อพื้นผิวด้านนอก

6.10.ในระหว่างการปฏิบัติงานแต่ละครั้ง ควรทำการควบคุมเชิงลบเพื่อตรวจสอบความน่าเชื่อถือของการทำงานปลอดเชื้อ

6.11.เมื่อดูดซับของเหลวจากแบคทีเรีย คุณต้องใช้ลูกดูดเพื่อดูดซับอย่าสัมผัสหลอดด้วยปากของคุณโดยตรง

6.12.เข็มฉีดวัคซีนจะต้องผ่านการฆ่าเชื้อด้วยเปลวไฟก่อนและหลังการใช้งานแต่ละครั้งหลังจากเย็นลงแล้วก็สามารถเพาะเชื้อได้

6.13.หลอด หลอดทดลอง จานเพาะเชื้อ และเครื่องใช้อื่นๆ ที่มีของเหลวจากแบคทีเรียควรแช่ในถังฆ่าเชื้อที่มีสารละลายไลโซล 5% สำหรับการฆ่าเชื้อ และนำออกมาล้างหลังจากผ่านไป 24 ชั่วโมง

6.14.หากมีของเหลวจากแบคทีเรียหกลงบนโต๊ะหรือพื้น คุณควรเทสารละลายกรดคาร์โบลิก 5% หรือไลโซล 3% ทันทีในบริเวณที่ปนเปื้อนเป็นเวลาอย่างน้อย 30 นาทีก่อนจะบำบัดเมื่อเสื้อผ้าและหมวกสำหรับทำงานเปื้อนของเหลวจากแบคทีเรีย ควรถอดออกทันทีและนำไปซักหลังจากการฆ่าเชื้อด้วยไอน้ำแรงดันสูง

6.15.อุปกรณ์ทั้งหมดที่มีแบคทีเรียที่มีชีวิตจะต้องได้รับการฆ่าเชื้อก่อนที่จะล้างด้วยน้ำประปาห้ามมิให้ก่อให้เกิดมลพิษในท่อระบายน้ำโดยเด็ดขาด

6.16.ควรตรวจสอบจำนวนโคโลนีในห้องปลอดเชื้อทุกเดือนเมื่อเปิดม้านั่งที่สะอาดแล้ว ให้นำจานเพาะเชื้อปลอดเชื้อที่มีเส้นผ่านศูนย์กลางด้านใน 90 มม. จำนวนหนึ่ง และฉีดอาหารเลี้ยงเชื้อวุ้นที่มีสารอาหารประมาณ 15 มล. ที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้วและทำให้เย็นลงจนถึงอุณหภูมิประมาณ 45°C โดยปลอดเชื้อหลังจากแข็งตัวแล้ว ให้วางกลับด้านที่อุณหภูมิ 30 ถึง 35 บ่มเป็นเวลา 48 ชั่วโมงในตู้ฟัก ℃หลังจากพิสูจน์ความเป็นหมันแล้ว ให้นำจาน 3 ถึง 5 ใบมาวางไว้ทางซ้าย กลาง และขวาของตำแหน่งการทำงานหลังจากเปิดฝาครอบและเปิดทิ้งไว้เป็นเวลา 30 นาที ให้วางคว่ำลงในตู้ฟักที่มีอุณหภูมิ 30 ถึง 35°C เป็นเวลา 48 ชั่วโมง แล้วนำออกมาพิจารณา.จำนวนแบคทีเรียเบ็ดเตล็ดโดยเฉลี่ยบนจานในพื้นที่ทำความสะอาดคลาส 100 จะต้องไม่เกิน 1 โคโลนี และจำนวนเฉลี่ยในห้องสะอาดคลาส 10,000 จะต้องไม่เกิน 3 โคโลนีหากเกินขีดจำกัด ควรฆ่าเชื้อในห้องปลอดเชื้ออย่างทั่วถึงจนกว่าการตรวจสอบซ้ำจะเป็นไปตามข้อกำหนด

7. โปรดดูบท (วิธีการตรวจสอบความเป็นหมัน) ใน "วิธีการตรวจสอบสุขอนามัยยา" และ "แนวทางปฏิบัติมาตรฐานจีนสำหรับการตรวจสอบยา"

8. ฝ่ายจัดจำหน่าย: ฝ่ายบริหารคุณภาพ

คำแนะนำทางเทคนิคของห้องคลีนรูม:

หลังจากได้รับสภาพแวดล้อมปลอดเชื้อและวัสดุปลอดเชื้อแล้ว เราต้องรักษาสถานะปลอดเชื้อเพื่อศึกษาจุลินทรีย์ที่รู้จักโดยเฉพาะหรือใช้หน้าที่ของพวกมันมิฉะนั้นจุลินทรีย์ต่างๆ จากภายนอกสามารถผสมเข้าไปได้ง่าย ปรากฏการณ์การผสมของจุลินทรีย์ที่ไม่เกี่ยวข้องจากภายนอกเรียกว่าการปนเปื้อนของแบคทีเรียในจุลชีววิทยาการป้องกันการปนเปื้อนเป็นเทคนิคที่สำคัญในงานด้านจุลชีววิทยาการฆ่าเชื้อโดยสมบูรณ์ในด้านหนึ่งและการป้องกันการปนเปื้อนอีกด้านหนึ่งเป็นเทคนิคปลอดเชื้อสองด้านนอกจากนี้ เราต้องป้องกันไม่ให้จุลินทรีย์ที่อยู่ระหว่างการศึกษา โดยเฉพาะจุลินทรีย์ก่อโรคหรือจุลินทรีย์ดัดแปลงพันธุกรรมที่ไม่มีอยู่ในธรรมชาติ หลุดออกจากภาชนะทดลองของเราไปสู่สภาพแวดล้อมภายนอกเพื่อจุดประสงค์เหล่านี้ ในทางจุลชีววิทยา มีหลายมาตรการ

ห้องปลอดเชื้อมักเป็นห้องขนาดเล็กที่จัดตั้งขึ้นเป็นพิเศษในห้องปฏิบัติการจุลชีววิทยาสามารถสร้างด้วยแผ่นและกระจกได้พื้นที่ไม่ควรใหญ่เกินไป ประมาณ 4-5 ตารางเมตร และความสูงควรประมาณ 2.5 เมตรควรจัดห้องบัฟเฟอร์ไว้ด้านนอกห้องปลอดเชื้อประตูห้องบัฟเฟอร์และประตูห้องปลอดเชื้อไม่ควรหันไปในทิศทางเดียวกันเพื่อป้องกันไม่ให้อากาศไหลเวียนจากแบคทีเรียเบ็ดเตล็ดทั้งห้องปลอดเชื้อและห้องบัฟเฟอร์จะต้องกันอากาศเข้าอุปกรณ์ระบายอากาศภายในอาคารจะต้องมีอุปกรณ์กรองอากาศพื้นและผนังห้องปลอดเชื้อจะต้องเรียบ สะสมสิ่งสกปรกได้ยาก และทำความสะอาดง่ายพื้นผิวการทำงานควรได้ระดับทั้งห้องปลอดเชื้อและห้องบัฟเฟอร์มีการติดตั้งไฟอัลตราไวโอเลตแสงอัลตราไวโอเลตในห้องปลอดเชื้ออยู่ห่างจากพื้นผิวการทำงาน 1 เมตรพนักงานที่เข้าห้องปลอดเชื้อควรสวมเสื้อผ้าและหมวกที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้ว

ปัจจุบันห้องปลอดเชื้อส่วนใหญ่อยู่ในโรงงานจุลชีววิทยา ในขณะที่ห้องปฏิบัติการทั่วไปใช้ม้านั่งที่สะอาดหน้าที่หลักของโต๊ะทำความสะอาดคือการใช้อุปกรณ์ไหลเวียนอากาศแบบลามินาร์เพื่อกำจัดฝุ่นเล็กๆ ต่างๆ รวมถึงจุลินทรีย์บนพื้นผิวการทำงานอุปกรณ์ไฟฟ้าช่วยให้อากาศผ่านตัวกรอง hepa จากนั้นเข้าสู่พื้นผิวการทำงาน เพื่อให้พื้นผิวการทำงานอยู่ภายใต้การควบคุมของอากาศปลอดเชื้อที่ไหลอยู่เสมอนอกจากนี้ยังมีม่านอากาศความเร็วสูงด้านข้างใกล้กับด้านนอกเพื่อป้องกันไม่ให้อากาศจากแบคทีเรียภายนอกเข้ามา

ในสถานที่ที่มีสภาวะที่ยากลำบาก สามารถใช้กล่องไม้ปลอดเชื้อแทนม้านั่งที่สะอาดได้กล่องปลอดเชื้อมีโครงสร้างเรียบง่ายและเคลื่อนย้ายสะดวกด้านหน้ากล่องจะมีรูสองรูซึ่งจะถูกกั้นด้วยประตูแบบผลักดึงเมื่อไม่ได้ใช้งานคุณสามารถยืดแขนออกได้ระหว่างการผ่าตัดส่วนบนของด้านหน้ามีกระจกเพื่อความสะดวกในการใช้งานภายในภายในกล่องมีโคมไฟอัลตราไวโอเลต และอุปกรณ์และแบคทีเรียสามารถเข้าทางประตูเล็กๆ ด้านข้างได้

ปัจจุบันเทคนิคการปฏิบัติงานปลอดเชื้อไม่เพียงมีบทบาทสำคัญในการวิจัยและการประยุกต์ทางจุลชีววิทยาเท่านั้น แต่ยังมีการใช้กันอย่างแพร่หลายในเทคโนโลยีชีวภาพหลายประเภทอีกด้วยตัวอย่างเช่น เทคโนโลยีแปลงพันธุกรรม เทคโนโลยีโมโนโคลนอลแอนติบอดี ฯลฯ